ПЦР

Полимеразная цепная реакция

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной биологии, который заключается в многократном увеличении малых концентраций определенных фрагментов ДНК в биоматериале.

Принцип работы Построен на обнаружении участка ДНК или РНК каждого отдельно микроорганизма. Для каждого возбудителя создан свой специфический генетический детектор, эталонный фрагмент ДНК, который по принципу комплементарности точно обнаруживает «свой» фрагмент ДНК и запускает реакцию создания огромного количества его копий.

Для проведения ПЦР исследований используют несколько компонентов Праймеры Полимераза DNTP-дезоксинуклеотидтрифосфат Образец ДНК; Буферный раствор

При проведении ПЦР выполняется 30 циклов, каждый из которых состоит из трех этапов:

Общая схема

Приборы, используемы при проведении метода ПЦР

Ламинар типа «ПЦР-бокс»

Твердотельный термостат «Гном»

Детектирующий амплификатор DTprime/DTlite(Real-time) в комплекте с компьютером

Насос с колбой-ловушкой Аспиратор с колбой-ловушкой

Штатив рабочее место 200×0,2 мл Штатив рабочее место 50×1,5 мл

Ламинарный шкаф ll класса защиты

Центрифуга «Pico-17» (с ротором на 24 пробирки)

Центрифуга (вортекс) Microspin FV 2400

Дозаторы (Biohit, серия Proline Plus) (0.5-10)мкл-1 шт, (2-20) мкл-1 шт, (20-200) мкл-1 шт, (100-1000) мкл-1 шт

Штатив "карусель" для 6-ти дозаторов (Biohit)

Штативы для хранения пробирок 100×1,5 мл

Амплификатор CFX96 Touch Преимущества: Возможность одновременно исследовать 5 мишеней в одной пробе. Высокая скорость работы благодаря большой мощности терморегулятора и точности его работы, обеспечивающих изменение температуры термоблока со скоростью до 5˚С/сек. Нет необходимости в перекалибровке и смене ламп благодаря использованию в качестве источника света светодиодов, обладающих неизменным во времени спектром излучения, большим сроком службы и малым нагревом. Заводская калибровка для минимизации времени, затрачиваемого на инсталляцию. Режим множественного сбора данных, включая 1-цветное скоростное сканирование при использовании SYBR Green. Наличие функции температурного градиента. Возможность создания высокопроизводительных систем – 4 прибора могут управляться одновременно с одного компьютера. Графический сенсорный дисплей, упрощающий программирование прибора.

В большинстве диагностических центров с помощью ПЦР возможна диагностика следующих инфекций: Названиеболезни Какой микроб выявляется? Хламидиозполовых дыхательных путей и органов Chlamydiatrachomatis(хламидиятрахоматис) Гепатит В, С Вирус гепатита В,C Уреаплазмозполовых органов Ureaplasmaurealiticum(уреаплазмауреалитикум) Ureaplasmaparvum(уреаплазмапарвум) Микоплазмоздыхательных путей и половых органов Mycoplasmahominis(микоплазмозахоминис),Mycoplasmagenitalium(микоплазмозагепиталиум) Кандидоз половых органов (молочница) Candidaalbicans(кандидаалбиканс) Бактериальныйвагиноз(гарднереллез) Gardnerellavaginalis(гарднереллавагиналис) Трихомониаз Trichomonasvaginalis(трихомонасвагиналис) Инфекционный мононуклеоз ВирусЭпшетейна-Барр Туберкулез Микобактерия туберкулеза Папилломавируснаяинфекция (ВПЧ) Вирус папилломы человека (в том числе его онкогенные виды 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, и 59) ВИЧ (СПИД) Вирус иммунодефицита человека Герпеснаяинфекция Вирусы простого герпеса 1 и 2 типов Грипп Вирусы гриппа А и В

Достоинства: -Универсальность. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем. -специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа. - Чувствительность. Возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя. - Оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день. -При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни.

Недостатки: -Требует соблюдения строжайших правил оснащения лаборатории. - В помещении должен быть установлен фильтр биологической очистки со степенью 99,9%.